菌种保藏的方法

1、沙土保藏法。取河沙加入10%稀盐酸，加热煮沸30分钟，以去除其中的有机质。倒去酸水，用自来水冲洗至中性。烘干，用40目筛子过筛，以去掉粗颗粒，备用。另取非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红土，加自来水浸泡洗涤数次，直至中性。烘干，碾碎，通过100目筛子过筛，以去除粗颗粒。

2、滤纸保藏法。将滤纸剪成0.5×1.2cm的小条，装入0.6×8cm的安瓿管中，每管1-2张，塞以棉塞，1.05 kg/cm，121℃灭菌30分钟。将需要保存的菌种，在适宜的斜面培养基上培养，使充分生长。取灭菌脱脂牛乳1-2ml滴加在灭菌培养皿或试管内，取数环菌苔在牛乳内混匀，制成浓悬液。用灭菌镊子自安瓿管取滤纸条浸入菌悬液内，使其吸饱，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。将安瓿管放入内有五氧化二磷作吸水剂的干燥器中，用真空泵抽气至干。将棉花塞入管内，用火焰按图ⅶ-13熔封，保存于低温下。需要使用菌种，复活培养时，可将安瓿管口在火焰上烧热，滴一滴冷水在烧热的部位，使玻璃破裂，再用镊子敲掉口端的玻璃，待安瓿管开启后，取出滤纸，放入液体培养基内，置温箱中培养。细菌、酵母菌、丝状真菌均可用此法保藏，前两者可保藏2年左右，有些丝状真菌甚至可保藏14-17年之久。此法较液氮、冷冻干燥法简便，不需要特殊设备。

3、寄主保藏法。寄主保藏法用于尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。冷冻保藏法可分低温冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法，其中最常见的是甘油管冷冻保藏法。

4、甘油管保存法。甘油管冷冻保藏法是利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的。其方法是将80%的甘油高压蒸汽灭菌待用。将培养好的斜面菌种用无菌水制成高浓度的菌悬液。取1ml灭菌甘油放入与菌液充分混匀，使甘油浓度约为10%-30%，于-70℃下冻存。-20℃保存时间较短。或采用体积比为8：2的甘油-生理盐水，加入新鲜培养的菌体肉汤，混合均匀后至-20℃冰箱保存。该方法适用于一般细菌的保存，同时也适用于链球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌种，适用范围广，操作简便，效果好，无变异现象发生。甘油-生理盐水保存液保存菌种优于甘油原液，其原因可能是加入生理盐水适当降低了甘油的高渗作用，且有肉汤培养物适量增加保存液的营养成分，从而更好地保护了待保存的菌株。

5、冷冻干燥保藏法。先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥），其中真空冷冻干燥法最常见。真空冷冻干燥保藏法是兼具低温、干燥、除氧三方面菌种保藏的主要因素，除不宜于丝状真菌的菌丝体外，对病毒、细菌、放线菌、酵母及丝状菌孢子等各类微生物都适用，不宜用冻干法保存的微生物不到2%。真空冷冻干燥法是在低温下快速将细胞冻结，然后在真空条件下干燥，使微生物的生长和酶活动停止。为了防止在冷冻和水分升华过程中对细胞的损害，要采用保护剂来制备细胞悬液，使菌在冻结和脱水过程中起到保护作用的溶质，通过氢键和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。即是使样品中的水分在冰冻状态下，抽真空减压，使冻结的冰直接升华为水蒸气，使样品达到干燥。干燥后的微生物在真空下封装，与空气隔绝，达到长期保藏的目的。

扩展阅读

纯化菌种的方法

1、首先，精种的分离是整个工作的第一个关键步骤， 分离培养基的确定，分离培养条件的选择，如培养温度、湿度、好氧或厌机培养等，在分离的最初阶段一般不给予严密的培养条件，尽可能分离到尽可能多的纯菌种。

2、在这种情况下，在菌种的分离阶段可以选用广泛的分离培养基，各种分离培养基中还应针对性地加人目的酶产生菌的作用底物。分离对象可包括细菌、真菌、酵母菌及放线菌等。

3、分离条件也应做到多样化，比如吸取的土样稀释液量的控制、不同的培养温度选择等。分离到的单菌落应立即转移到分离成分一致的新鲜斜面上，等获得纯培养之后就可着手进行初筛。

4、菌种的初筛有两种方法，用简单的定性反应进行初筛，在最初分离阶段就给予特殊的培养基或培养条件，进而让目的菌株得以繁殖，尽可能地把只成为目的菌的菌株或只将其最适菌株的一株纯化分离。总之，初筛的目的就是要用最简单和最快捷的方法来对大量的待筛菌进行测试。

5、目的酶产生菌高产突变体的获得，高产突变菌种有着十分重要的意义。首先，高产突变株常常能够比亲株产生高出很多倍数量的酶。在另外一些情况下，突变株能够产生比较少的不需要的酶或其他代谢产物，因而有利于酶的回收和提纯。

6、最后，获得高产突变株的方法，采用物理和化学因子来处理微生物，并使其发生变异。常用的化学诱变剂有氮介子气、亚硝酸、硫酸二乙酯、环氧乙烧、乙烯亚胺等。物理因子有: 紫外线、x射线、7 射线等。另外，还有其他的一些方法。

常用的菌种保藏方法

1、斜面低温保藏法

这是最简单最普通的保藏方法。首先将菌种在适宜的斜面培养基（一般pda）上培养成熟后，选择菌丝生长粗壮，边缘保存。一般保存温度4～6℃，除草菇和银耳菌种外（10～15℃），此方法对其他食用菌都适宜，一般菌种可保藏2～4个月，所以需定时移接。此法保藏虽然方便，但是保藏时间短，需经常转管，也很容易发生衰退变异现象。因此，不能用作长期保藏，最好与其他方法结合起来保藏。另外，为了减少保藏期间培养基水分蒸发，琼脂最好加到2.5%。为防止菌种在保藏过程中产酸分的积累，应加入0.2%的磷酸氢二钾、磷酸二氢钾等缓冲盐类，同时，培养成熟后，最好将棉塞管口外剪平，并用矿蜡封或换以无菌木塞，这样做也可以减少培养基水分的散失，延长保存时间。在农村如果没有冰箱，可采用土法保藏。即把保藏用的斜面菌种换上无菌橡皮塞，并用矿烛蜡封后密闭的广口瓶中，悬入井底保藏。

2、贮藏室保藏法

原种和栽培种一般只在贮藏室短期保藏，贮藏室温度0～10℃为好。室内应清洁、干燥、无光，应经常检查温度和湿度，以降低其生活力，减少变异退化，防止杂菌污染，避免过早出菇。温度越高，保存的时间越短。

如何自制菌种

1、需要买一些没有经过处理的小麦或者黑麦，甚至是玉米都可以。然后把一个咖啡过滤网罩在上面，盖上盖子。

2、浸泡之后，将麦子装进玻璃罐子，然后放进锅中煮沸20分钟杀菌。

3、煮过之后，放置冷却，然后从蘑菇菌柄上截下一段。（无菌的没有经过污染的）

4、然后将取出来的部分菌柄部分放进玻璃罐中。

5、用咖啡过滤网，因为它们需要呼吸。

6、然后你需要把这个罐子放到一个黑暗、湿润、凉爽的地方。

7、大概三周之后，罐子长满了白色的菌丝。

8、然后就可以将这些转移到你要准备种植蘑菇的稻草捆上。这样一罐菌种，可以接种3个那样的种植袋，可以生产出很多的蘑菇。